斜纹夜蛾气味结合蛋白基因GOBP2转录调控区的克隆及活性分析

论文摘要

[目的]本文旨在鉴定重要农业害虫斜纹夜蛾（Spodoptera litura）气味结合蛋白基因GOBP2的顺式作用元件,为揭示GOBP2的转录调控机制和开发基于嗅觉干扰的害虫防治技术奠定基础。[方法]利用5′RACE技术克隆GOBP2的5′UTR,确定转录起始位点;利用染色体步移技术（chromosome walking）克隆GOBP2的5′侧翼区,并利用在线网站预测转录因子结合位点;利用PCR克隆GOBP2的5′侧翼区逐步缺失片段,并构建到pGL3-Basic载体上;将各重组载体分别转染Sf9细胞,48 h后收获细胞并利用双荧光素酶报告系统检测转录活性。[结果]获得斜纹夜蛾GOBP2长23 bp的5′UTR,由此确定GOBP2的转录起始位点。通过染色体步移获得斜纹夜蛾GOBP2的5′端调控区2 025 bp的序列,发现启动子的典型TATA框;针对-1 000 bp序列的转录活性分析表明,最强转录活性区域位于-243～-207 bp,具有1个增强子;此外,在-971～-891 bp及-890～-811 bp各有1个增强子,在-244～-315 bp存在1个沉默子。[结论]获得斜纹夜蛾GOBP2的转录起始位点及顺式作用元件,为进一步研究GOBP2的转录调控机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试虫饲养
•   1.2 斜纹夜蛾触角总RNA提取、cDNA合成、基因组DNA提取与引物设计
•   1.3 SlitGOBP2的5′RACE
•   1.4 SlitGOBP2的5′侧翼区染色体步移
•   1.5 SlitGOBP2转录因子结合位点预测
•   1.6 SlitGOBP2的5′侧翼区逐步缺失片段的PCR克隆
•   1.7 双荧光素酶报告基因载体的构建
•   1.8 昆虫Sf9细胞的培养与转染
•   1.9 SlitGOBP2启动子相对活性的测定
•   1.10 数据分析
• 2 结果与分析
•   2.1 SlitGOBP2 5′UTR克隆及转录起始位点的确定
•   2.2 SlitGOBP2 5′侧翼区序列克隆及启动子和转录因子结合位点分析
•   2.3 SlitGOBP2 5′侧翼区转录活性区域的初步分析
•   2.4 SlitGOBP2 5′侧翼区转录活性区域的进一步定位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韩琪,胡波,李升云,董双林

关键词: 斜纹夜蛾,气味结合蛋白,双荧光素酶报告基因检测,启动子,增强子,沉默子

来源: 南京农业大学学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,植物保护

单位: 南京农业大学植物保护学院

基金: 国家自然科学基金项目(31672350,31872300)

分类号: Q78;S433.4

页码: 1059-1066

总页数: 8

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