利用番鸭整合素α4亚基多克隆抗体对MDRV感染雏番鸭淋巴细胞归巢的研究

论文摘要

为研究番鸭呼肠孤病毒（MDRV）感染鸭后肠淋巴细胞归巢中的细胞定位,本研究通过RT-PCR方法扩增番鸭肠道α4编码基因,构建重组表达质粒p ET-His-α4,将其转化E.coli BL21 （DE3）表达了r His-α4,以其为抗原免疫福建黄兔,制备了抗r His-α4多克隆抗体,该多克隆抗体的间接ELISA和琼扩效价分别为1∶52 000和1∶32。利用制备的多抗对MDRV感染的番鸭淋巴细胞进行western blot和间接免疫荧光检测,结果显示体外淋巴细胞在感染MDRV后,α4蛋白的表达量呈增长趋势;雏番鸭感染MDRV后盲肠的α4+淋巴细胞增加的同时CFSE+淋巴细胞也显著增加,表明MDRV感染后诱导淋巴细胞大量表达了α4整合素,导致淋巴细胞向肠道黏膜组织归巢。本研究制备的番鸭r His-α4兔源多克隆抗体可以用于番鸭整合素α4的检测,同时也为进一步阐明MDRV感染诱导淋巴细胞归巢的分子机制研究奠定了基础。

论文目录

• 1材料与方法
•   1.1主要实验材料
•   1.2主要试剂
•   1.3引物的设计与合成
•   1.4重组表达质粒的构建及重组蛋白的表达
•   1.5多克隆抗体制备及效价测定
•   1.6 MDRV感染后的体外番鸭淋巴细胞整合素α4表达水平的检测
•   1.7 MDRV感染对雏番鸭淋巴细胞归巢至盲肠肠道黏膜影响的IFA鉴定
• 2 结果
•   2.1 重组表达载体pET-His-α4的构建与鉴定
•   2.2 重组蛋白的表达、纯化与鉴定结果
•   2.3 抗r His-α4多克隆抗体的制备及效价检测
•   2.4 MDRV感染对体外番鸭淋巴细胞表达α4蛋白水平的影响
•   2.5 CFS E活细胞染色
•   2.6 MDRV感染对雏番鸭淋巴细胞归巢至盲肠肠道黏膜的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘珍妮,李明慧,骆钰,刘秉珲,黄诗杭,吴宝成,黄一帆,吴异健

关键词: 番鸭整合素,原核表达,多克隆抗体,番鸭呼肠孤病毒,淋巴细胞归巢

来源: 中国预防兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建农林大学动物科学学院,福建省兽医中药与动物保健重点实验室

基金: 福建省自然科学基金项目(2017J01597)

分类号: S852.65

页码: 847-852

总页数: 6

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