4-羟基他莫昔芬依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白功能研究

论文摘要

目的:验证小分子4-羟基他莫昔芬（4-HT）依赖的内含肽调控绿色荧光蛋白（e GFP）功能的可行性。方法:根据e GFP的结构与功能,在蛋白上选取7个氨基酸位点,通过同源重组方式将内含肽序列插入不同位点,转染293T细胞系后通过流式细胞术检测e GFP的表达情况,分析4-HT依赖的内含肽调控剪接效率。结果:在选取的7个氨基酸位点中,有5个具有调控效果,其中S148位点的4-HT调控效果最好,4-HT的最适工作浓度为4μmol/L。结论:在e GFP蛋白上发现一个新的高效的4-HT调控的内含肽剪接位点S148,与已报道位点R109相比,剪接效率提高8倍。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 扩增内含肽片段与线性化载体pMD-eGFP
•   1.3 重组载体pMD-eGFP-Intein的构建和阳性克隆鉴定
•   1.4 质粒转染HEK293细胞系
•   1.5 流式细胞术检测细胞荧光强度
•   1.6 统计学处理
•   1.7 4-HT最适浓度的探究
• 2 结果
•   2.1 pMD-eGFP-Intein的构建
•   2.2 内含肽对eGFP蛋白的调控
•   2.3 4-HT最适浓度的探究
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵拯浩,王步森,王玉东,朱丹妮,董铭心,侯利华,陈薇

关键词: 内含肽,羟基他莫昔芬,小分子依赖,绿色荧光蛋白

来源: 生物技术通讯 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

基金: 国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治（2016ZX10004001-009）

分类号: Q78

页码: 619-623

总页数: 5

文件大小: 3216K

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