导读:本文包含了亲和筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:噬菌体,亲和,破伤风,血吸虫,多肽,印迹,色谱。
亲和筛选论文文献综述
魏煜如[1]（2017）在《虎杖与夏枯草中胰脂肪酶抑制剂的亲和筛选》一文中研究指出肥胖严重危害着人类的健康,直接或间接地导致多种疾病的产生。为治疗肥胖,各种减肥药物和替代疗法正在不断研发之中,其中,胰脂肪酶(Pancreatic Lipase,PL)抑制剂减肥药物研究成为热点之一,奥利司他(Orlistat)即为其突出代表,但其仍存在许多毒副作用。为此,研发一种高效、低毒、可长期服用的抑制胰脂肪酶减肥药物成为目前主要任务。鉴于天然植物成分具有结构多样、来源广、毒副作用相对较小,从中筛选安全、有效的PL抑制剂成为主要研究目标,同时,鉴于传统药物筛选存在耗时长、目标性差、分离过程繁杂等不足,选择一种高效、目标性强、分离简单的手段是必不可少的。本实验室前期选用磁珠固定化酶筛选天然产物PL抑制剂,取得了良好结果,但其固定化酶合成条件并未进行优化。本论文在此基础上,首先优化了磁珠固定化PL合成条件,并进行了验证。其次通过调研大量文献,选取了8种粗提物具有较好抑制PL活性的天然植物,制备了它们的粗提物和相应亚组分,并对其抑酶活性进行了测定。然后,选择抑酶活性较好的虎杖、夏枯草亚组分,对其进行了固定化酶筛选,并测定了筛选出的抑制剂抑酶活性和抑制类型。最后,通过联合指数法(Chou-Talalay)分析了不同PL抑制剂之间的协同拮抗作用,为配制有效成分组合中药和了解抑制剂作用机制打下一定的基础。主要内容与研究结果如下:1.固定化酶合成条件优化及模型验证。首先通过单因素实验及响应面分析建立了合成固定化酶多元二次回归方程模型,优化了合成固定化酶反应条件,然后对其结构进行电镜及红外表征,最后利用橙皮苷(阳性抑制剂)及五味子醇甲(阴性抑制剂)对优化的固定化酶进行稳定性、专一性及重复性验证实验。结果表明:缓冲液pH值7.48、PL浓度20.32 mg/mL、温度35.40℃为最佳合成条件,PL成功固定于磁珠之上,且储存2周后固定化酶的活力仍保持80%以上,可特异性筛选出阳性抑制剂,重复利用五次后酶活仍保持50%以上。本实验成功为下述固定化酶筛选抑制剂实验奠定了一定的基础。2.几种天然植物的提取分离及对酶抑制作用的测定。首先测定了8种天然植物粗提物抑制PL的作用,然后选取抑酶活性较好的4种植物,进一步分离,最后分别测定各个组分对PL的抑制作用。结果表明:8种天然植物中,虎杖80%乙醇分离部位及夏枯草40%乙醇分离部位抑酶活性最高,IC_(50)值分别为90μg/mL、80μg/mL,可作为下述固定化酶筛选实验对象。3.虎杖与夏枯草最高抑酶活性组分中抑制剂的筛选。利用固定化酶分别对虎杖与夏枯草两种植物的最高抑酶活性组分进行胰脂肪酶抑制剂的筛选,并对筛选出的抑制剂进行了抑酶活性和抑制类型的测定。结果表明:分别从两种植物组分中筛选出了4个PL抑制剂,它们包含1个萜类(熊果酸),2个酚类(咖啡酸、白藜芦醇),2个黄酮类(芦丁、橙皮苷),3个蒽醌类(大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖、大黄素甲醚),其中橙皮苷的抑酶效果最好(IC_(50)=31.5±4.4μg/m L)。4.PL抑制剂之间协同效应研究。选取9种不同类型抑制剂,包括非竞争性抑制(Noncompetitive Inhibition,NI)、竞争性抑制(Competitive Inhibition,CI)和反竞争性抑制(Uncompetitive Inhibition,UI)各3种,通过中效原理(即Chou-Talalay联合法)研究了不同抑制类型及相同抑制类型之间的联合效应。结果表明:NI类抑制剂之间呈拮抗效应,其余相同抑制类型抑制剂之间及不同抑制类型抑制剂之间均呈协同效应。(本文来源于《山西大学》期刊2017-06-01）
赵睿,黄嫣嫣,金钰龙[2]（2017）在《靶向多肽的设计、亲和筛选及其在肿瘤细胞成像与杀伤中的应用》一文中研究指出多肽作为蛋白质的基本结构单元,具有高度多样性、生物相容性和结构可设计性等优点。设计多肽库,建立多肽筛选新方法,获取针对目标物的高选择性亲和多肽,可为生命物质的分析检测提供有力工具。针对与癌细胞肿瘤特性密切相关的分子靶标,构建基于多肽识别的靶向探针,发展高特异性、高灵敏度的分析新方法,对于肿瘤的发现、转移预警和治疗提供具有重要意义。以与肿瘤细胞恶性转化和新陈代谢密切相关的溶酶体四次穿膜蛋白LAPTM4B为靶标,基于正-反义肽相互作用以及反义肽简并性原理,针对靶标蛋白第二胞外区片段,设计并合成了特殊组合化学(本文来源于《第21届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集》期刊2017-05-19）
何佳媛,黄嫣嫣,赵睿[3]（2015）在《肿瘤靶向多肽探针的设计、合成、液质分析及亲和筛选初探》一文中研究指出发现新型高特异性的肿瘤标志物,建立高灵敏度的分析检测新技术,是肿瘤早期预警和治疗的新思路。多肽既是蛋白质的重要组成部分,也是重要的生理活性物质,参与并调控着生物体内许多重要的生理、生化功能。相比于常用的抗体探针,多肽作为生物探针,具有分子量小,稳定性高,靶向穿透能力强等优点,在复杂生物样品的分离分析领域表现出广阔的应用前景。由h LAPTM4B基因所表达的溶酶体四次穿膜蛋白(LAPTM4B),在乳腺癌、肝癌、卵巢癌、子(本文来源于《第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集（第四分册）》期刊2015-04-19）
刘天齐[4]（2013）在《肝胰腺细小病毒病流行情况初步调查及病原核酸与核衣壳蛋白亲和筛选探究》一文中研究指出肝胰腺细小病毒（Hepatopancreatic parvovirus, HPV）是引起对虾疾病的重要病原之一，在病毒分类中属于细小病毒科（Parvoviridae），浓核病毒亚科（Densovirinae）。主要的对虾养殖品种都是HPV的自然宿主，在中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）中尤为常见，病毒感染可导致幼虾死亡或引起矮小残缺综合症（RDS），蟹类等其他甲壳类动物也可携带并传播该病毒。HPV核酸为单链线性DNA，基因组大小约6kb，由单一核衣壳蛋白包裹。病毒粒子无囊膜，正二十面体形，直径22~23nm。基因组有3个开放阅读框（ORF），编码2个非结构蛋白和1个结构蛋白——核衣壳蛋白。目前，GenBank数据库中已提交的HPV全基因序列有5条，分别为泰国株（DQ002873）、澳大利亚株（DQ458781）、印度株（FJ410797）、中国株（GU371276）和韩国株（JN082231）。HPV不同地理株的基因序列分析数据表明HPV基因组存在较多的遗传变异情况。目前，针对HPV的检测方法主要采用国际上通用的组织病理学观察，常规PCR检测法等；已报道的real-time PCR检测法，由于引物及探针序列的差异，不适用于HPV中国地理株。因此，本研究以HPV中国株基因序列为主要依据，设计引物和TaqMan探针，建立real-time PCR检测法，并应用于样品检测。本实验室已经建立了HPV核衣壳蛋白的原核重组表达系统，在此基础上，依据单链核酸具有功能性天然构象与核衣壳蛋白存在特异性识别能力并产生选择性装配机制这一特性，运用指数富集的配基系统进化（SELEX）技术，进行HPV核酸与核衣壳蛋白亲和筛选探究。本研究的主要内容包括：1、样品调查与分析。在2011年5月至2012年10月期间，在山东半岛及环渤海主要对虾养殖地区进行了流行病学调查，采集数百份样品，主要运用了现场诊断技术，病原检测试剂盒，组织病理学观察，普通PCR法，real-time PCR法等手段，进行病原检测。对于疫病流行病学调查及疾病的防控和预警提供了有力的科学依据，具有重要的意义。2、HPV中国株real-time PCR检测方法建立和应用。根据HPV中国株基因组序列，设计了一对引物及TaqMan探针，进行real-time PCR反应体系优化、特异性分析、标准曲线构建及灵敏度分析、重复性分析，并应用于样品检测。分析结果表明：新建立的HPV real-time PCR检测法灵敏特异，重复性良好，适合HPV中国株的检测。临床应用检测结果显示：所检样品中，中国明对虾HPV阳性率高达76%，且具有较高的病毒拷贝数，凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）HPV阳性率很低，且检出的病毒拷贝数也低；HPV强阳性的样品，其养殖水体中的其他环境生物甚至养殖海水中也检出HPV。3、HPV核酸与核衣壳蛋白亲和筛选探究。利用AKTA explorer100完成重组表达的HPV核衣壳蛋白的纯化、复性，使用超声随机打断的方法构建HPV基因组随机dsDNA库，尝试利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选与HPV核衣壳蛋白高亲和的DNA片段。本节实验成功探索出完整的该病毒蛋白与核酸亲和筛选的实验方法，对于今后的深入研究提供了参考依据。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2013-06-06）
王晗,于蕊,张晓鹏,任军,谢娜[5]（2013）在《人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选》一文中研究指出目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重迭PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。(本文来源于《军事医学》期刊2013年02期）
杨亚军,李剑勇,刘希望,李冰,张继瑜[6]（2012）在《分子印迹色谱柱对中药复方有效成分的亲和筛选及鉴定》一文中研究指出以已知活性的药物[M+H]~+313为模板,合成了分子印迹聚合物(MIP),并以此装填了液相色谱柱,对中草药复方的分部位提取物进行亲和分离,得到[M+H]~+249的亲和性成分,推测其为槐定碱或苦参碱。应用在线MIP液相色谱柱和子离子扫描的方法,对该亲和性成分进行了鉴定。苦参碱标准品的在线保留时间与该成分相似,而槐定碱的差异则较大;同时,中草药样品、苦参碱标准品、中草药样品+苦参碱标准品等3个样品,具有相同的子离子分布与丰度,而槐定碱标准品的子离子丰度与中草药样品有明显差异。因此,结合液相色谱行为和子离子扫描的结果,推断该亲和性成分为苦参碱。(本文来源于《西北地区第七届色谱学术报告会甘肃省第十二届色谱年会论文集》期刊2012-07-01）
杨亚军,李剑勇,刘希望,李冰,张继瑜[7]（2012）在《分子印迹色谱柱对中药复方有效成分的亲和筛选及鉴定》一文中研究指出目的对中药及其复方的分部位提取物的有效成分进行亲和分离,并对其进行鉴定。方法以已知活性的药物[M+H]+313为模板,合成了分子印迹聚合物(MIP),装填液相色谱柱,对中药分部位提取物进行亲和分离;对亲和性成分应用在线MIP液相色谱柱和子离子扫描的方法,进行鉴定。结果从中药复方制剂的氯仿提取部分,得到亲和性成分[M+H]+249,推测其为苦参碱或槐定碱;苦参碱标准品的在线保留时间与该成分相似,而槐定碱的差异则较大;同时,中草药样品、苦参碱标准品、中草药样品+苦参碱标准品等3个样品,具有相同的子离子与丰度,而槐定碱标准品的子离子丰度与中草药样品有明显差异。结论结合液相色谱行为和子离子扫描的结果,推断该亲和性成分为苦参碱。(本文来源于《第十一届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集》期刊2012-06-21）
刘彦[8]（2011）在《日本血吸虫脱尾活童虫表膜结合肽的亲和筛选与功能鉴定》一文中研究指出血吸虫病是一种重要危害人类身体健康和经济发展的寄生虫病,是世界主要公共卫生问题之一。当前,用于血吸虫病防治的方法,尽管有抗病原药物-吡喹酮用于人、畜化疗以控制病情和减少传染源,有杀中间宿主的氯硝柳胺等遥药用于人畜活动频繁的易感地带灭螺灭蚴,有丰富的家畜管理和人群健教的经验,但很难控制其流行传播,这说明现行防治技术尚存在不足。例如,在防治中起关键作用的吡喹酮,不仅只能在一个用药时点发挥作用,而且有研究发现其抗虫效果在降低。对此,本研究认为在抗感染疫苗和抗虫新药尚未问世之前,深入探索提高毗喹酮生物利用度和增强抗虫效果的方法是解决现场防治技术问题的重要课题之一。众所周知,杀成虫的吡喹酮和抗童虫的青篙素类药物用于人和家畜体内后表现代谢快和分布面大的特点,从而使药物的生物利用度低。如何来解决这一问题,本研究依据血吸虫生物学特性(需通过表膜吸收和结合宿主有关分子作为生长繁殖的因子)提出了虫体表膜有可能存在与外源分子发生特异性结合的分子,如能通过筛选获得,就有可能用其作靶向药物杀虫(提高药物利用度,减少药物所致毒副反应)。在本文中开展研究解决的关键问题是从血吸虫活虫体表膜中能筛选和鉴定出具有特异结合能力的多肽分子,并阐明其性质和功能,以期为进一步的靶向药物制剂等方面研究奠定工作基础。第一章日本血吸虫脱尾活童虫表膜结合噬菌体短肽的筛选与鉴定目的：利用噬菌体展示肽对日本血吸虫尾蚴脱尾活童虫作体外差异亲和淘选,以期获得对虫体具有拮抗或/和靶向作用的特异性短肽。方法：体外差异淘选与S.j脱尾活童虫结合、与尾蚴不结合的特异性短肽：将噬菌体12肽库用尾蚴预吸附后,取未与尾蚴结合的噬菌体肽库扩增后与脱尾童虫孵育,经洗脱、再扩增后,获取的目标肽库再次逆向吸附——扩增——淘选——扩增；经过3轮差异淘选,随机挑取15个克隆抽提DNA测序；通过氨基酸翻译和生物信息学分析测序结果；利用噬菌体回收实验、Western-blot及免疫组织化学检测分析所得噬菌体克隆与S.j童虫及成虫体被结合状态。结果：经3轮体外差异淘选获得4种不同序列的特异性M13噬菌体短肽MppZL6、MppZL4、MppZL1和MppZLO,其中MppZL0无插入片段；经生物信息学分析,MppZL6、MppZL4及MppZL1短肽均由8-9个亲水的极性氨基酸残基及疏水的非极性氨基酸残基交错构成,含精氨酸残基,等电点分别为6.07,8.75,8.50；BLAST分析表明,MppZL1与家鼠载脂蛋白B有53%(7/13)的同一性,MppZL6与Sj CHGC07116蛋白有69%(9/13)同一性,MppZL4与阴道毛滴虫自交第叁代的表面抗原BspA样蛋白有80%(8/10)同一性。噬菌体回收实验显示克隆MppZL4与脱尾童虫的结合力显着高于MppZL6, MppZL1; Western blot结果显示,只有与MppZL4结合的成虫膜蛋白中有一条特异性条带,其大小为45.0kDa；免疫组化染色结果表明：MppZL4可与S.j毛蚴脱尾童虫、肺期童虫、肝期童虫及24天成虫结合。结论：通过噬菌体展示肽对活虫体作体外差异亲和淘选获得的特异性M13噬菌体MppZL4,可在小鼠体内特异性地与S.j的童虫和成虫表膜结合。第二章MppZL4及人工合成短肽ZL4的功能检测目的：通过MppZL4及人工合成的ZL4在体内外对日本血吸虫(S.j)的杀伤实验,检测ZL4的生物学功能,并从细胞水平上初步探讨ZL4的作用机制。方法：洗脱回收率检测MppZL4对S.j的靶向性：于小鼠感染S.j3d、及10d后,分别尾静脉注射MppZL41012pfu,15min后剖杀小鼠,心脏灌注,取出肝肺,洗脱噬菌体测定丰度,设立空白对照及阴性对照组；于小鼠感染S.j24d后,尾静脉注射MppZL41012pfu,15min后剖杀小鼠,心脏灌注冲虫,并取出肝肺,洗脱噬菌体测定丰度,同时洗脱虫体噬菌体并计数。体外杀伤实验检测MppZL4对S.j脱尾童虫的杀伤作用：无菌条件下MppZL4处理S.j脱尾童虫,每24小时美蓝染色后观察一次,连续观察72h,统计虫体死亡率,设置阳性对照、阴性对照及空白对照组。小鼠感染S.j24d后,尾静脉注射MppZL41012pfu,15min后剖杀小鼠取出虫体,无菌条件下制备S.j细胞,作免疫细胞化学观察MppZL4在细胞上的定位；体外培养MppZL4处理的S.j细胞1d后,MTT试剂盒检测其抑制率,并利用公式计算IC50。人工合成罗丹明标记的ZL4短肽RhB-ZL4,同法体外检测其对S.j童虫的结合功能及杀伤功能,体内检测其对S.j成虫的结合功能。结果：洗脱回收率检测MppZL4噬菌体靶向性结果显示：在感染小鼠体内,第3d时,肺组织MppZL4丰度为0.869±0.018,较高,而肝组织MppZL4丰度7.211±4.818,偏低；第10d则肺组织MppZL4丰度为0.239±0.065,较低,而肝组织MppZL4噬菌体丰度15.833±8.224,偏高；第24d时,各组噬菌体洗脱数无明显差异,但是虫体MppZL4洗脱丰度17.256±9.588远高于M13KE洗脱丰度0.202±0.056。体外杀伤实验观察到MppZL4致死率高于东方田鼠血清阳性对照组(P=0.000)：48h后,其死亡率已达到100%。免疫细胞化学检测结果显示,MppZL4主要沉积于S.j大圆细胞、叁角形细胞及不规则细胞的细胞膜上。MTT检测细胞毒效应显示,MppZL4浓度为1010pfu时,即具有明显的细胞毒性(P=0.000),且随着MppZL4浓度的增高,毒性效应增强；IC50≈1021。 RhB-ZL4检测结果显示：RhB-ZL4体外与能与脱尾童虫体外特异性结合,其体外24hr及48hr致死率与MppZL4(?)(?)性对照组无显着性差异,72hr后死亡率为100%；体内能与S.j成虫特异性结合结论：MppZL4分子对血吸虫作用具有靶向性和一定的拮抗性及细胞毒性；RhB-ZL4可与日本血吸虫童虫及成虫特异性结合,对日本血吸虫童虫有一定的拮抗性。第叁章ZLW/pEGFP-C2质粒的构建及其功能鉴定目的：观察日本血吸虫表膜特异结合肽合成基因构建的ZLW/pEGFP-C2质粒体外转染S.j脱尾童虫效率,了解其抗虫作用。方法：构建ZLW/pEGFP-C2质粒,运用二甲基亚砜(DMSO)作用下的高浓度质粒浸泡技术,将ZLW/pEGFP-C2对机械转化日本血吸虫童虫进行体外转染,以瞬时表达的EGFP为阳性标记,在倒置荧光镜下对虫体进行观察；转染后童虫培养48h,抽提虫体总RNA和全虫蛋白,分别用RT-PCR和Western blot检测ZLW基因和EGFP基因在童虫体内的表达；转染后虫体继续培养,于24、48、72及96h不同时点用美兰染色法鉴别虫体死活并计数；上述实验均设空质粒和正常童虫作平行对照。结果：成功构建ZLW/pEGFP-C2质粒,经ZLW/pEGFP-C2质粒转染的虫体在镜下观察显示有10%的转染率,其EGFP主要位于虫体皮层,以口、腹吸盘最为明显；RT-PCR扩增出259bp,片断大小与预期相符,经测序与ZLW序列一致；Western-blot证实EGFP基因在童虫虫体内有表达。抗虫效果显示,24及48h时,实验组、对照组死亡率无明显差异性(P24=0.600,P48=0.508)；72h后,实验组死亡率显着高于对照组(P72=0.000)；96h后实验组死亡率达到100%。结论：成功构建ZLW/pEGFP-C2质粒,DMSO作用下的高浓度质粒浸泡技术成功地将ZLW/pEGFP-C2质粒引入日本血吸虫童虫体内并获得表达；ZLW/pEGFP-C2质粒转染后有一定的抗童虫效果。(本文来源于《中南大学》期刊2011-09-01）
葛宜兵[9]（2011）在《噬菌体展示HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库的构建及亲和筛选》一文中研究指出第一部分噬菌体展示HIV-1 Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体库的构建目的用噬菌体展示的方法构建Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选。方法采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库。结果成功构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,结果显示文库的库容量为5.0×10~6,滴度为2.65×10~(12) TU/ml,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论所建文库达到进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。第二部分HIV-1 Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库的亲和筛选目的通过不同HIV-1 Tat免疫血清及抗体对HIV-1 Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体库进行亲和筛选,以期获得抗原性保留、生物学活性降低新型免疫原的代表性序列。方法用兔抗PET32-Tat38-61抗体、兔抗PET32-Tat38-101抗体及兔抗PET32 - Tat(38-101)血清同时对HIV-1 Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体库进行5轮筛选,每种筛选分别随机挑取10个第3、4和5轮的阳性克隆进行序列分析。结果筛选过程中,空载体5S比例及反向插入序列比例呈现出逐渐减少并稳定的趋势,显示了筛选的有效性。阳性筛选克隆的序列分析显示,筛选获得了多个在2种抗体和1种血清筛选后文库中均出现的共同序列及在各自筛选文库中出现的重复序列,阳性序列出现了一些特征性的51位和55位氨基酸的关联51P-55L(4次重复)和51Q-51L(3次重复)。结论我们通过有效的筛选,筛选出一些特征性的代表性氨基酸序列,为后续研究Tat分子中碱性区重要抗原的特性及基于该抗原的Tat治疗性疫苗的研发提供了一新的可行途径。第叁部分HIV-1 Tat38-61(51N/55N)突变体蛋白的构建表达目的构建HIV-1 Tat38-61(51N/55N)突变体融合蛋白,检测其免疫原性,并比较突变体蛋白和天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE蛋白生物活性的差异。方法我们挑选出叁个经过亲和筛选出来的代表性序列, Tat38-61-F3-16(51L/55T)、Tat38-101-F4-16(51H/55R)、Tat38-101血清-F3-11(51S/55P),根据大肠杆菌偏好密码子优化后的HIV-1型株Tat DNA序列设计引物,我们首先对全长Tat1-101的51和55位氨基酸进行定点突变,再以此为模板PCR扩增Tat38-61编码序列,结果顺利地获得了51和55位氨基酸定点突变的Tat38-61编码序列,T/A克隆法将其克隆到pMD18-T载体进行测序。将测序正确的Tat38-61克隆至原核表达载体pET32a,构建其原核表达质粒pET32a-Tat38-61。将表达质粒转入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白。结果PCR方法扩增出72bp的Tat38-61基因片段;限制性酶切分析及序列测定表明重组表达质粒pET32a-Tat38-61的构建完全正确,SDS-PAGE显示在大肠杆菌中表达出相对分子质量为21300D(道尔顿)的PET32a-Tat38-61突变体融合蛋白。并通过ELISA实验与天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE成功竞争抑制。结论Tat38-61表位是Tat的主要表位,在对抗天然Tat中38-61抗体的抑制最好的分别是天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。叁种突变体蛋白对天然Tat中38-61抗体均有抑制作用,但抑制作用均弱于天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2011-04-21）
魏琦,刘彦,曾庆仁,陈欲晓,周军[10]（2010）在《日本血吸虫童虫表膜结合多肽的亲和筛选与初步鉴定》一文中研究指出目的筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫表膜特异性结合的多肽并鉴定。方法利用噬菌体十二肽库与日本血吸虫活童虫靶分子之间的亲和力结合,经3轮吸附-洗脱-扩增,从末次回收的结合噬菌体中随机挑取20个克隆进行测序。根据测序结果 ,选取出现次数最多的噬菌体克隆作为目标噬菌体,免疫组化检测目的噬菌体,并回输到已感染日本血吸虫的小鼠体内,2.5h后处死小鼠,回收肝脏和日本血吸虫童虫,分别洗脱与肝脏和童虫结合的噬菌体,进行统计学分析。结果经3轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的0.77×10-8到第3轮的0.75×10-5,说明噬菌体得到了有效富集。DNA测序结果表明,20个噬菌体克隆中的15个克隆呈现QHPRIRKOOOOO序列。免疫组化结果显示,表达该序列的噬菌体能与童虫表膜有效结合;体内回输试验证实,该噬菌体能有效地靶向结合于体内日本血吸虫童虫表膜。结论筛选获得的短肽QHPRIRKOOOOO能有效地靶向结合日本血吸虫童虫表膜。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2010年03期）
亲和筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
多肽作为蛋白质的基本结构单元,具有高度多样性、生物相容性和结构可设计性等优点。设计多肽库,建立多肽筛选新方法,获取针对目标物的高选择性亲和多肽,可为生命物质的分析检测提供有力工具。针对与癌细胞肿瘤特性密切相关的分子靶标,构建基于多肽识别的靶向探针,发展高特异性、高灵敏度的分析新方法,对于肿瘤的发现、转移预警和治疗提供具有重要意义。以与肿瘤细胞恶性转化和新陈代谢密切相关的溶酶体四次穿膜蛋白LAPTM4B为靶标,基于正-反义肽相互作用以及反义肽简并性原理,针对靶标蛋白第二胞外区片段,设计并合成了特殊组合化学
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
亲和筛选论文参考文献
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