罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型的建立及诱导分化

论文摘要

本实验以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）为实验对象,探索罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化及传代培养方法。本论文首先设计不同的原代培养条件:培养时间、接种密度、换液方式,探索最佳的首次传代培养条件。实现传代后,通过比较不同血清、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、谷氨酰胺（Gln）对罗非鱼前脂肪细胞传代培养的影响,探索罗非鱼前脂肪细胞的新传代培养基,并对细胞进行了冻存、复苏,从而建立了罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型。之后,本论文分析了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞及在其他不同离体培养条件下（24小时离体培养;原代培养汇合期;原代诱导分化）的脂肪细胞与活体中脂肪组织的脂肪酸组成差异。研究发现,细胞离体培养时间越长,脂肪酸组成成分越少、越简单,但C16:0、C18:0、C18:1n-9和C18:2这4种脂肪酸一直存在且保持较高比例。罗非鱼脂肪组织里,不饱和脂肪酸比例显著高于饱和脂肪酸,其中,单不饱和脂肪酸含量最高。然而,体外培养的脂肪细胞里,饱和脂肪酸所占比重都高于不饱和脂肪酸。最后,本文探索了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化方法。本文设计了四种诱导分化培养基:（1）培养基1:15%FBS+10μg/ml胰岛素+DMEM/F12;（2）培养基2:培养基1+1.0mmol/L DEX+0.5mmol/L IBMX;（3）培养基3:培养基2+0.4mmol/L吲哚美辛;（4）培养基4:培养基2+2μg/ml鳕鱼肝油脂肪酸（甲基酯）。12天后,采用油红染色比较观察细胞的生长状况,结果发现培养基4对细胞的诱导结果最佳。本论文工作建立了较为系统的罗非鱼前脂肪细胞的传代培养和分化诱导方法,并对体外培养的脂肪细胞与脂肪组织间的脂肪酸组成有了新的认识,为进一步开展罗非鱼脂代谢提供了可靠的细胞研究平台。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
•   第一节 脂肪组织和脂肪细胞的定义、功能和分类
•   第二节 不同脂肪细胞的起源与分化
•   第三节 脂肪细胞的离体培养研究
•   第四节 本实验研究的目的及意义
• 第二章 罗非鱼前脂肪细胞首次传代及后续传代培养方法的探索
•   2.1 前言
•   2.2 材料与方法
•   2.3 实验结果
•   2.4 讨论
•   2.5 小结
• 第三章 罗非鱼前脂肪细胞传代培养基成分的探索
•   3.1 前言
•   3.2 材料与方法
•   3.3 实验结果
•   3.4 讨论
•   3.5 小结
• 第四章 罗非鱼脂肪组织,与不同离体培养条件下的脂肪细胞间脂肪酸成分的比较分析
•   4.1 前言
•   4.2 材料方法
•   4.3 实验结果
•   4.4 讨论
•   4.5 小结
• 第五章 罗非鱼传代前脂肪细胞诱导成熟方法的比较分析
•   5.1 前言
•   5.2 材料方法
•   5.3 实验结果
•   5.4 讨论
•   5.5 小结
• 全文总结与展望
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 温加静

导师: 杜震宇

关键词: 罗非鱼,前脂肪细胞,传代培养,脂肪酸,诱导分化

来源: 华东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 华东师范大学

分类号: Q813.11

总页数: 77

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