导读:本文包含了抗癫痫肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:抗癫痫肽,串联体,融合蛋白
抗癫痫肽论文文献综述
王宗仁,高碧峰,袁有才,李晶华,张德安[1]（2007）在《重组抗癫痫肽二串体的表达、纯化与鉴定》一文中研究指出目的:利用基因工程方法表达抗癫痫肽(AEP)串联体蛋白,并进行纯化、鉴定。方法:PCR扩增AEP及AEP-His基因片段,并分别克隆至测序载体中;测序正确后,利用基因重组技术获得二串体基因,构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His,甲醇诱导AEP2-His在毕赤酵母中表达,用Ni-chelating Sepharose FF柱纯化表达的融合蛋白,并用抗His单克隆抗体进行Western blot鉴定。结果:构建了AEP二串体酵母表达载体,获得了纯化的AEP2-His蛋白,其相对分子质量约20 000。结论:用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法;AEP2-His蛋白的成功表达为其功能研究奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2007年06期）
张德安,王宗仁,高碧峰,邵中军,李晶华[2]（2007）在《抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达》一文中研究指出目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。(本文来源于《中国生化药物杂志》期刊2007年03期）
高碧峰[3]（2007）在《抗癫痫肽抗癫痫作用靶位筛选及功能探讨》一文中研究指出癫痫是最常见的神经系统疾病之一,病程长,致残率高,易反复。资料显示,我国癫痫患病率为7‰,年发病率为28.8/10万,目前我国约有900万癫痫病人,占全世界患者的1/5～1/6,同时每年新增加病人数约40万[1]。由于癫痫患者需要长期服用抗癫痫药物(多数达3年以上),因此极易产生耐药性;同时由于抗癫痫药物较大的毒副作用,如胃肠道刺激、肝功能损害、记忆和认知功能减退、骨损害及致痫作用等[2-6],也限制了其临床应用和疗效。约有25%～30%的患者转为难治性癫痫。因其直接威胁病人的身心健康,影响患者和家庭成员的生活质量并加重经济负担,所以寻求一种更安全有效的治疗癫痫的药物及方法,已成为医学科学研究的热点。抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)是从东亚钳蝎粗毒液中分离的一种具有生物学活性的多肽,研究证实它有良好的抗癫痫作用,具有作用强、用量小、毒性低的特点[7]。但其治疗癫痫的作用机制尚不明确。为进一步探讨AEP抗癫痫的作用机制,我们通过基因重组技术分别构建原核和真核表达载体,诱导表达重组蛋白,通过复制海人酸癫痫大鼠模型,制备脑匀浆,采用pull-down实验检测与AEP相互作用的分子,利用生物信息学方法分析靶蛋白,初步探讨AEP的抗癫痫作用机制。为研制新型的抗癫痫药物提供理论依据,也为中药的作用机理研究提供新的思路和方法。我们的研究结果可以归纳为以下几点:1.成功构建了含有AEP基因片段的测序载体PUC18-T-AEP和原核表达载体pGEX-4T-1-AEP;将重组表达载体pGEX-4T-1-AEP转化至BL21(DE3)感受态大肠杆菌细胞中,经IPTG诱导获得了高效表达,经Western blot验证,证实为融合蛋白;对表达菌进行超声裂解,发现融合蛋白以包涵体形式存在;通过对包涵体蛋白进行洗涤、尿素变性和透析复性后,用谷胱甘肽琼脂糖珠进行了纯化。2.复制了海人酸癫痫大鼠模型,制备脑匀浆蛋白,采用GST pull-down实验筛选AEP的相互作用蛋白,但经过多次尝试后未能达到预期目的,考虑与AEP分子量较小,而与其融合的分子伴侣GST较大,掩盖了其有效结合位点有关。3.通过基因重组技术,构建了AEP二串体毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His,电转化至毕赤酵母菌SMD1168感受态细胞,采用G418筛选出高拷贝的转化子,用pPIC9K载体自带通用引物进行PCR反应,鉴定AEP2-His基因整合于染色体基因组中后,甲醇诱导在毕赤酵母中获得表达,用抗His单克隆抗体进行Western blot验证;用Ni-chelating Sepharose FF柱纯化AEP2-His蛋白,纯化后用BCA蛋白定量试剂盒定量并进行了电泳鉴定。4.复制海人酸癫痫大鼠模型,并取海马组织,采用膜蛋白提取试剂盒提取海马组织细胞膜蛋白,与结合有AEP2-His蛋白的Ni-chelating Sepharose FF柱共孵育,通过His pull-down筛选AEP的相互作用分子,同时设对照。结果提示:与对照组相比,AEP2-His蛋白孵育组有4条比较明显的蛋白条带,将这4条蛋白条带切取下来,进行质谱分析。质谱分析表明:这4种蛋白分别为突触前膜蛋白SNAP-25、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酰胺受体(NMDAR)、谷氨酸脱羧酶(GAD)。因此我们推测这4中蛋白可能就是AEP发挥抗癫痫作用的靶蛋白,至于他们之间是通过何种分子通路进行信号转导而发挥抗癫痫作用的,尚待进一步研究。(本文来源于《第四军医大学》期刊2007-04-01）
张德安,王宗仁,邵中军,高碧峰,李晶华[4]（2007）在《抗癫痫肽/GST融合表达及包涵体蛋白复性纯化》一文中研究指出[目的]获得高纯度的谷胱甘肽硫转移酶/抗癫痫肽(GST-AEP)融合蛋白。[方法]异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组大肠杆菌DH5α表达GST-AEP融合蛋白,融合蛋白包涵体经过洗涤、变性、复性后,通过12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,凝胶薄层扫描检测其纯度,透析管进一步纯化蛋白,BCA法定量。[结果]从融合蛋白包涵体中获得了纯度达90%以上的目的蛋白,定量约0.163μg/μl。[结论]建立了有效纯化融合蛋白包涵体GST-AEP的方法,为对AEP进一步的相关研究奠定了基础。(本文来源于《浙江中医药大学学报》期刊2007年01期）
王宗仁,邵中军,李晶华,行利,马静[5]（2005）在《抗癫痫肽重组腺伴病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的为了研究蝎毒癫痫肽对癫痫模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴病毒(AAV)载体。方法将AEP外源性核酸片段插入AAV-shufer质粒pSSHG-Neo的KpnI-BamH I位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及构建的pSSHG-AEP叁质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/AEP,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012PFU/mL。结论成功地制备了AEP重组腺伴随病毒(rAAV/AEP)载体,为癫痫基因治疗实验奠定了基础。(本文来源于《中草药》期刊2005年12期）
边六交,杨晓燕,王辉,刘兴博[6]（2005）在《钳蝎毒中抗癫痫肽、镇痛肽和抗肿瘤肽的快速同时分离和鉴定》一文中研究指出采用ShimPackWCX1型阳离子交换高压色谱柱对中国东亚钳蝎全蝎毒进行了分离,在鉴定了其中的抗癫痫肽、镇痛肽和抗肿瘤肽活性峰的基础上,应用ShimPackDIOL300型凝胶排阻高压色谱柱对它们进行了进一步分离和鉴定,可以得到较纯的3种多肽。在高压色谱所提供的全蝎毒分离信息的基础上,应用与ShimPackWCX1色谱柱具有相同交换基团的、具有较大吸附容量的CMSepharoseCL6B软胶介质在低压色谱上对全蝎毒进行了分离,并分别对其中的抗癫痫肽、镇痛肽和抗肿瘤肽进行了鉴定。(本文来源于《分析化学》期刊2005年05期）
于家琨,张景海,王起振,刘崇铭[7]（1993）在《东亚钳蝎毒抗癫痫肽作用机制研究》一文中研究指出本文用整体大鼠和猫隔离皮层,研究了东亚钳蝎毒抗癫痫肽(AEP)的抗癫痫作用机制。实验表明,AEP的抗癫痫作用依赖于单胺类神经递质的存在。(本文来源于《沈阳药学院学报》期刊1993年01期）
于家琨,张景海,王起振,刘崇铭[8]（1992）在《东亚钳蝎毒抗癫痫肽的作用及其与已知药的作用比较》一文中研究指出本文用头孢霉素Ⅱ,马桑内酯,印防已毒素和青霉素造成清醒大鼠实验性癫痫发作,研究了东亚钳蝎毒抗癫痫肽(AEP)的抗癫痫作用,比较了AEP与已知抗癫痫药在作用方式及特点上的异同。实验表明,AEP对上述4种模型癫痫发作有明显的抑制作用,在不同的模型上表现了不同的方式及性质。与苯妥英钠、卡马西平和抗癫痫灵相比,AEP作用强,用量小,毒性低;在印防已毒素模型上作用与苯妥英钠相似,在青霉素模型上作用与抗痫灵相似。(本文来源于《沈阳药学院学报》期刊1992年03期）
刘崇铭,高殿振,于佩玉,周新华[9]（1989）在《东亚钳蝎毒及其成分抗癫痫肽的抗癫痫作用》一文中研究指出本文报告了河北产东业钳蝎毒及从蝎毒分离出的抗癫痫肽,对用头孢菌素和马桑内脂诱发大鼠癫痫的对抗作用。同时检测并记录了大鼠的全部ECoG和行为。以癫痫发作的潜伏期、发作程度、死亡率和平均总持续时间为指标,比较生理盐水对照组与安定、蝎每、抗癫痫肽作用的强度。结果,安定、蝎毒、抗癫痫肽均使头孢菌素引起癫痫的潜伏期比对照组延长,发作程度减轻,平均总持续时间缩短。安定组与抗癫痫肽组与对照组差异显着(P<0.05)。安定、蝎毒、抗癫痫肽均使马桑内脂诱发癫痫的潜伏期明显延长,发作程度明显减轻,死亡率由80%下降到零,发作平均总持续时间亦显着缩短。各组与对照组差异非常显着(P<0.01)。(本文来源于《沈阳药学院学报》期刊1989年02期）
刘崇铭,高殿振,周新华,崔焱,张桂范[10]（1988）在《东亚钳蝎毒及其成分抗癫痫肽的抗惊厥作用》一文中研究指出本文报道了河北产东亚钳蝎毒及从粗毒中纯化的抗癫痫肽的抗惊厥作用,本实验用咖啡因、美解眠、士的宁引起惊厥,用生理盐水作空白对照,安定做阳性对照。生理盐水对照组,惊厥发生率均达100%;严重惊厥发作率分别为50%、70%、50%;死亡率分别为40%、30%、50%,各组惊厥平均总持续时间为115min、59.5min、72min。安定对抗咖啡因惊厥的作用较小(P>O.05);但使美解眠和士的宁惊厥各项指标显着下降(P<0.05)。抗癫痫肽对抗咖啡因惊厥的作用较强,四项指标均显着下降(P<0.01),使美解眠惊厥各项指标亦明显下降(P<0.01),但稍弱;对抗士的宁惊厥的作用强度与安定相似(P<0.05)。蝎毒的抗惊厥作用较抗癫痫肽弱,与空白对照组比较差异不显着。(本文来源于《沈阳药学院学报》期刊1988年02期）
抗癫痫肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗癫痫肽论文参考文献
[1].王宗仁,高碧峰,袁有才,李晶华,张德安.重组抗癫痫肽二串体的表达、纯化与鉴定[J].生物技术通讯.2007
[2].张德安,王宗仁,高碧峰,邵中军,李晶华.抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达[J].中国生化药物杂志.2007
[3].高碧峰.抗癫痫肽抗癫痫作用靶位筛选及功能探讨[D].第四军医大学.2007
[4].张德安,王宗仁,邵中军,高碧峰,李晶华.抗癫痫肽/GST融合表达及包涵体蛋白复性纯化[J].浙江中医药大学学报.2007
[5].王宗仁,邵中军,李晶华,行利,马静.抗癫痫肽重组腺伴病毒载体的构建及鉴定[J].中草药.2005
[6].边六交,杨晓燕,王辉,刘兴博.钳蝎毒中抗癫痫肽、镇痛肽和抗肿瘤肽的快速同时分离和鉴定[J].分析化学.2005
[7].于家琨,张景海,王起振,刘崇铭.东亚钳蝎毒抗癫痫肽作用机制研究[J].沈阳药学院学报.1993
[8].于家琨,张景海,王起振,刘崇铭.东亚钳蝎毒抗癫痫肽的作用及其与已知药的作用比较[J].沈阳药学院学报.1992
[9].刘崇铭,高殿振,于佩玉,周新华.东亚钳蝎毒及其成分抗癫痫肽的抗癫痫作用[J].沈阳药学院学报.1989
[10].刘崇铭,高殿振,周新华,崔焱,张桂范.东亚钳蝎毒及其成分抗癫痫肽的抗惊厥作用[J].沈阳药学院学报.1988