核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位

论文摘要

核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum （Lib.） de Bary]是一类寄主范围广泛的植物病原真菌。MADS-box蛋白家族基因广泛存在于生物体中,参与调控细胞识别、新陈代谢、细胞周期等。核盘菌转录因子SsMCM1调控其子实体形成与致病性。为进一步揭示SsMCM1的作用机制,本研究以核盘菌野生型菌株uf-70的cDNA为模板,扩增得到SsMCM1基因,并与原核表达载体pET-28a（+）连接,构建成重组质粒转化到大肠杆菌BL21（pLysS）表达菌株中,通过IPTG的诱导和亲和层析,纯化得到SsMCM1蛋白,并以此为抗原获得抗血清,完成效价测定。利用特异性抗血清,与核盘菌不同组织蛋白进行特异性的免疫结合,发现其与核盘菌总蛋白、核盘菌细胞质总蛋白均特异性结合,而核盘菌细胞壁蛋白未发现特异性反应,表明SsMCM1不定位于核盘菌细胞壁上。此外,构建其亚细胞定位载体pCG-1301::SsMCM1,并将重组质粒转化到农杆菌中,通过农杆菌的侵染作用进行瞬时表达,发现SsMCM1定位于细胞核中,作为转录因子调控核盘菌的子实体发育与致病性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 目的基因的克隆与序列分析
•   1.3 原核表达载体的构建
•   1.4 重组质粒pET28a::SsM CM 1的原核表达及纯化
•   1.5 抗血清制备与效价测定
•   1.6 核盘菌SsM CM 1的亚细胞定位载体构建及亚细胞定位分析
• 2 结果与分析
•   2.1 目的基因获得、系统进化分析与生物信息学亚细胞定位分析
•   2.2 SsM CM 1融合蛋白的原核表达与亲和纯化
•   2.3 效价测定与抗血清特异性分析
•     2.3.1 间接ELISA测定抗血清的效价
•     2.3.2 Western blot抗血清特异性检测
•   2.4 核盘菌各组分蛋白Ss M CM 1特异性抗血清Western blot分析
•   2.5 荧光亚细胞定位检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王雪亮,刘言志,吕兴明,张艳华,张祥辉,刘金亮,潘洪玉,张鑫生

关键词: 核盘菌,转录因子,原核表达,亚细胞定位

来源: 植物病理学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 吉林大学植物科学学院,长春市绿化管理处

基金: 国家自然科学基金(31101394,31772108)

分类号: S432.44

DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000367

页码: 35-42

总页数: 8

文件大小: 307K

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