猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为了制备猪流行性腹泻病毒（PEDV）的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3～5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM,其轻链均为κ链。ELISA、Western Blot和免疫荧光鉴定结果表明,4株单抗均与N蛋白及PEDV具有良好的结合活性。复苏冻存的4株杂交瘤细胞,连续传代培养30代,4株杂交瘤细胞能够持续稳定分泌抗体,细胞上清的ELISA抗体效价均在1∶800以上。4株细胞诱生的小鼠腹水抗体效价为1∶105～1∶106。将单克隆抗体（4A7）用于免疫组化试验和IPMA时,其能够特异地识别PEDV人工感染猪小肠组织和Vero细胞内的病毒。上述实验结果表明,制备的单克隆抗体可以用于PEDV抗原检测以及体内病毒的组织定位分析,并可为进一步研发PEDV抗原或抗体检测技术奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞与毒株
•   1.2 主要试剂与试剂盒
•   1.3 实验动物
•   1.4 间接ELISA
•   1.5 PEDV-N重组蛋白的制备
•   1.6 动物免疫
•   1.7 杂交瘤细胞株的建立
•     1.7.1 细胞融合
•     1.7.2 阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆
•     1.7.3 杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性检测
•   1.8 单克隆抗体的大量制备
•   1.9 单克隆抗体的鉴定
•     1.9.1 单克隆抗体的类和亚类的鉴定
•     1.9.2 Western Blot试验
•     1.9.3 间接免疫荧光试验 （IFA）
•   1.10 单克隆抗体的初步应用
•     1.10.1 免疫过氧化物酶单层试验 （IPMA）
•     1.10.2 免疫组化
• 2 结果
•   2.1 免疫鼠血清特异性抗体
•   2.2 杂交瘤细胞株
•   2.3 单克隆抗体的类、亚类与型
•   2.4 单克隆抗体能与PEDV-N蛋白特异性结合
•   2.5 单克隆抗体能与PEDV特异性结合
•   2.6 单克隆抗体的初步应用
•     2.6.1 用于体外感染的PEDV鉴定
•     2.6.2 用于体内感染的PEDV检测与定位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张庆桥,王一鹏,魏艳秋,米建华,赵雪,孙立旦,宋勤叶

关键词: 猪流行性腹泻病毒,蛋白,杂交瘤细胞,单克隆抗体

来源: 中国兽医杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河北工程大学生命科学与食品工程学院,河北农业大学动物医学院河北省兽用生物制品工程技术研究中心,河北省涞水县畜牧水产局

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500703),国家自然科学基金项目(31772738),河北省科技计划项目(17226613D-2)

分类号: S852.651

页码: 31-35+3

总页数: 6

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