导读:本文包含了小鼠胚胎成纤维细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,胚胎,小鼠,纤维,干细胞,诱导,诱导性。
小鼠胚胎成纤维细胞论文文献综述
黄悦,严会文,王燕燕,苏敏[1]（2019）在《不同代昆明小鼠胚胎成纤维细胞的生长特性研究》一文中研究指出目的分离培养昆明小鼠成纤维细胞,研究其体外生长特性并用于胚胎干细胞培养。方法消化法分离培养获得昆明小鼠胚胎成纤维细胞,利用MTT法绘制各代细胞生长曲线,免疫荧光对各代细胞进行细胞骨架分析;用不同浓度丝裂霉素C(10μg/m L、20μg/m L和30μg/m L)分别处理MEFs 1、2、3 h,MTT法筛选饲养层制备的最佳条件,制备饲养层用于小鼠胚胎干细胞的培养。结果分离的小鼠胚胎成纤维细胞3～5代细胞增殖能力较好; 1～3代细胞微管微丝排列整齐,5代以后的细胞微管微丝排列紊乱; 10μg/m L丝裂霉素C处理2 h有利于小鼠胚胎干细胞的培养。结论体外分离培养的3～5代小鼠胚胎成纤维细胞可用于小鼠胚胎干细胞的培养。(本文来源于《局解手术学杂志》期刊2019年07期）
纪琼琼,李明华,王培军[2]（2019）在《不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞直接转化为神经干细胞效率的比较》一文中研究指出目的比较不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)直接转化为诱导型神经干细胞(induced neural stem cells,i NSCs)的效率,以进一步优化诱导方法。方法构建慢病毒表达载体p Lenti6. 3-Sox2-IRES2-EGFP,分别采用单转录因子Sox2、小分子物质、转录因子Sox2联合小分子物质共同作用叁种方法将MEFs直接转化为i NSCs。q PCR检测神经干细胞的标志基因和多潜能标志基因的表达。免疫荧光检测神经干细胞的标记物nestin,计算i NSCs的转染效率。i NSCs在分化培养基中贴壁培养7～14 d,免疫荧光分别检测神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的细胞标记物MAP2、GFAP和Olig2的表达。结果诱导后4～6 d,MEFs的形态发生明显改变。免疫荧光显微镜下的结果显示诱导因子Sox2加小分子的诱导方法较单独使用Sox2和单独使用小分子物质进行诱导的效率高,差异具有统计学意义(P<0. 05)。q PCR的结果证明,3组i NSCs多种神经干细胞的标志基因(Sox2、nestin、Blbp、Pax6)的表达均较MEFs明显增高,3组间差异无统计学意义(P>0. 05);共聚焦显微镜的结果证明3种方法诱导的i NSCs具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,3组间差异无统计学意义(P>0. 05)。结论转录因子Sox2联合小分子共同作用可显着提高MEFs转化为i NSCs的效率且并不改变i NSCs的细胞功能特点。3组的i NSCs均具有神经干细胞自我增殖和多向分化的能力。(本文来源于《同济大学学报(医学版)》期刊2019年03期）
杨瑞,熊乙丁,郭珊珊,廖业,夏嫱[3]（2019）在《前纤维蛋白多克隆抗体对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响》一文中研究指出目的制备抗刚地弓形虫前纤维蛋白(Tg PRF)的多克隆抗体,初步研究其对刚地弓形虫在小鼠胚胎成纤维细胞中增殖的影响。方法提取刚地弓形虫RH株RNA、扩增Tg PRF基因,并构建pET-30a (+)-Tg PRF重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定蛋白表达情况。目的蛋白经AKTA系统进行亲和层析纯化和超滤浓缩后进行蛋白质印迹分析(Western blotting)。将2 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,背部皮下多点注射免疫新西兰兔2只,首次免疫后每隔2周,用1 mg纯化的重组蛋白Tg PRF与等体积弗氏不完全佐剂加强免疫3次,末次免疫后10 d心脏采血。免疫后血清进行Western blotting鉴定及ELISA抗体效价检测。将胚胎成纤维细胞接种于96孔板中(4×10~3个细胞/孔),并加入10~4个刚地弓形虫速殖子(RH-GFP)。设空白对照组(A组),抗体干预组(B1、 B2和B3组),阴性血清组(C组)。B1、 B2和B3组分别加入1∶20、 1∶80、 1∶200稀释的抗Tg PRF兔血清100μl; C组加入1∶20稀释的免疫前兔血清100μl,每组均设3个复孔。培养72 h后荧光显微镜观察,通过Image pro 6.0软件分析虫体增殖情况。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 PCR扩增Tg PRF基因片段为510 bp, pET-30a (+)-Tg PRF经测序与目的序列完全一致。经IPTG诱导表达,Tg PRF蛋白相对分子质量(M_r)约为25 000,且高表达条带主要存在于上清中。Tg PRF蛋白经纯化浓缩后浓度为4 mg/ml, Western blotting分析显示,在M_r25 000处出现特异性条带。经细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测,抗Tg PRF血清对胚胎成纤维细胞未见毒性损伤。ELISA检测抗Tg PRF血清抗体效价> 1∶10~5;各实验组细胞于感染24 h时,A组(0.62±0.23)及C组(0.74±0.25)相对虫体数量高于B1组(0.35±0.16)(P <0.05),但与B2和B3组间差异无统计学意义(P> 0.05), B1～B3组虫体增殖抑制率分别为43.5%、 11.4%、 3.6%。感染48 h时,A组(3.61±0.66)与C组(3.38±0.78)相对虫体数量明显高于B1～B3组(P <0.01),而B1组(1.09±0.58)与B2组(1.92±0.73)低于B3组(2.47±0.84)(P <0.05), B1～B3组虫体增殖抑制率分别增高至69.9%、 46.9%、 31.7%;感染72 h时,A组(19.90±3.92)与C组(20.61±4.07)相对虫体数量高于B1组(5.58±2.43)与B2组(8.06±2.66)(P <0.01), B3组(16.02±6.46)明显升高。B1～B3组抑制率分别为72.0%、 59.5%、 19.5%。结论弓形虫Tg PRF蛋白能有效刺激新西兰兔产生抗体,且Tg PRF兔血清抗体在体外能有效抑制弓形虫速殖子在小鼠胚胎成纤维细胞中的增殖并呈现明显的量效关系,但并不能完全消除虫体。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2019年04期）
令文慧[4]（2019）在《应用“间接谱系转化”技术重编程小鼠胚胎成纤维细胞成为诱导性少突胶质细胞祖细胞的研究》一文中研究指出“间接谱系转化”技术借助基因载体,通过表达转录因子,将已分化的体细胞重编程成为特定谱系的祖细胞,为再生医学提供了安全、高效的新途径。神经细胞轴突外的髓鞘对于神经系统的信号传导和脑内稳态的维持至关重要,髓鞘的缺失或功能障碍会导致众多疾病,例如多发性硬化症(Multiple sclerosis,MS)和脑白质营养不良。少突胶质细胞祖细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的移植是治疗髓鞘相关疾病的一种潜在方法。然而,体内OPCs在大脑中仅占约5-8%,且在成人脑中维持缓慢增殖或静止的状态。因此,在脑损伤后,通过OPCs分化成为少突胶质细胞(Oligodendrocytes,OLs)进而修复损伤髓鞘的能力十分有限。鉴于此,本研究通过过表达叁种神经转录因子(Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10),将小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEFs)——NIH/3T3细胞重编程成为诱导性少突胶质细胞祖细胞(Induced oligodendrocyte precursor cells,iOPCs),其形态学和基因表达与原代OPCs相似,并具有体外分化的能力,为脱髓鞘疾病的细胞代替治疗、疾病模型构建和药物开发等奠定了基础。试验一:昆明小鼠原代OPCs的体外分离、培养和诱导分化小鼠OPCs是一种在体外极易受到损伤、不易存活的细胞。为了优化小鼠OPCs的体外分离培养体系,高效获得OPCs,并将其作为评估iOPCs质量的对照组,本研究通过探讨不同胎龄和消化方法对OPCs生长状况、细胞总数以及存活率的影响,筛选适宜条件,进一步优化OPCs的分离、纯化方案。结果表明:(1)采用0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化胎龄为18.5天小鼠胎儿脑皮质,所得的OPCs数量最多,与其余处理组之间均存在显着性差异(P<0.05),且极显着性高于对照组(P<0.01);(2)与1日龄新生小鼠相比,采用胎龄为18.5天的小鼠胎儿更容易分离得到OPCs,仅培养7-9天,细胞之间出现明显分层,且增殖速度较快,极大缩短了细胞培养时间;(3)无论是胎龄为18.5天的胎鼠还是1日龄新生小鼠,采用改良后的间隔震荡纯化方法纯化OPCs的存活率极显着性高于传统纯化方法(P<0.01),且其纯度较高(>97%);(4)分离所得OPCs能够在含有40 ng/mL叁碘甲状腺氨酸(Triiodothyronine,T3)的无血清诱导培养液中分化成为OLs,在含10%胎牛血清的培养液中分化成为Ⅱ型星形胶质细胞,且体外分化所得细胞的纯度可达95%以上。因此,采用胎龄为18.5天的小鼠胎儿进行脑皮质的采集,经0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化15 min的方法可以获得具有典型形态、生长良好且具有体外定向诱导分化能力的OPCs。试验二:不同载体介导神经转录因子Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞的条件优化为了提高神经转录因子Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞的效率,为iOPCs的制备奠定基础,本研究分别采用不同浓度(2.5μg/mL、5μg/mL和7.5μg/mL)的非病毒转染载体(Lipofectamine 2000和Lipofectamine LTX)结合不同浓度(1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL和5μg/mL)的质粒DNA,且采用磁纳米颗粒载体与质粒DNA 1:1结合后转染NIH/3T3细胞,以绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因作为报告基因,通过比较不同处理组的转染效率和细胞毒性,筛选出转染效率高、细胞毒性小的转染条件。结果表明:叁种试剂的最高转染效率处理组(7.5μg/mL Lipofectamine 2000结合3μg/mL质粒DNA处理组、7.5μg/mL Lipofectamine LTX结合2μg/mL质粒DNA处理组、2μg/mL Poly-MAG结合2μg/mL质粒DNA处理组)之间无显着性差异(P>0.05)。但是,当叁种试剂的转染效率达到最高时,Poly-MAG转染试剂对NIH/3T3细胞的毒性极显着性低于Lipofectamine 2000与Lipofectamine LTX转染试剂的细胞毒性(P<0.01)。此外,由于磁性纳米颗粒载体Poly-MAG具有顺磁性,在外源性磁场的作用下,它能够快速地吸引至到细胞表面,有助于Olig 2质粒DNA的稳定表达。因此,宜采用2μg/mL Poly-MAG介导2μg/mL Olig 2质粒DNA转染NIH/3T3细胞。试验叁:应用“间接谱系转化”技术重编程NIH/3T3细胞成为iOPCs的可行性研究为了建立NIH/3T3细胞向iOPCs的“间接谱系转化”体系,本试验采用磁性纳米颗粒载体Poly-MAG介导Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10转录因子在NIH/3T3细胞中过表达,并对重编程所得细胞进行形态学观察、免疫细胞化学染色、荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)以及Western Blot检测,旨在获得iOPCs,为髓鞘再生机制研究、药物筛选和细胞移植治疗等奠定基础。结果表明:重编程所得细胞具有以下特征:(1)具有OPCs的典型形态学特征,细胞呈圆形或椭圆形生长,折光性强,多数有两个突起,少数有叁个突起,与小鼠原代OPCs十分类似;(2)表达OPCs特异性抗原——A2B5,A2B5~+细胞的数量占68.37±2.05%;(3)与对照组相比,重编程所得细胞的PDGFRα、S100β、NG2和Olig 2基因的表达量呈现出极显着性的上调(P<0.01);(4)能够体外诱导分化成为MBP~+的OLs和GFAP~+的Ⅱ型星形胶质细胞,其阳性率分别为72.67?2.52%和75.36?1.98%;(5)与小鼠原代OPCs相比,iOPCs的A2B5蛋白水平差异不显着(P>0.05),这说明过表达叁个神经转录因子所得到的细胞与小鼠原代OPCs相似,有OPCs特异性蛋白A2B5的表达。因此,采用Poly-MAG介导Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10的过表达能够将已分化的NIH/3T3细胞重编程成为iOPCs。结论:宜采用0.125%胰蛋白酶结合0.25%鸡血清消化18.5天胎龄昆明小鼠胚胎的脑皮质,混合培养7-9天后细胞出现明显分层,通过间隔震荡纯化方法,可以高效获得形态正常、增殖较快且具有分化能力的OPCs;在外源性磁场的作用下,采用2μg/mL Poly-MAG结合2μg/mL Olig 2质粒DNA能够更为高效地转染NIH/3T3细胞,且细胞毒性较低;利用该磁性纳米颗粒转染体系介导叁个神经转录因子Olig 2、Nkx 6.2和Sox 10的过表达能够将NIH/3T3细胞重编程成为iOPCs,为脱髓鞘机制的研究和相关疾病的治疗等提供了丰富的细胞资源。(本文来源于《西南大学》期刊2019-04-08）
王琦,都帅,赵全民,李庆杰[5]（2019）在《鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响及其机制》一文中研究指出目的:探讨鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响,并阐明其相关作用机制。方法:选取对数生长期的NIH/3T3细胞,加入不同剂量(1.56、3.13、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00和200.00mg·L~(-1))鹿茸多肽作为实验组,以加入0mg·L~(-1)鹿茸多肽的细胞作为空白对照组,以加入50μg·L~(-1)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的细胞作为阳性对照组。MTT法检测各组NIH/3T3细胞存活率,ELISA法检测各组NIH/3T3细胞中胶原蛋白分泌情况,划痕愈合实验检测各组NIH/3T3细胞的迁移能力,Western blotting法检测各组NIH/3T3细胞的细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK 1/2)的磷酸化蛋白(p-ERK 1/2)表达水平,免疫荧光法检测转化生长因子β1 (TGF-β1)的表达情况。结果:与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00、50.00、100.00及200.00mg·L~(-1)鹿茸多肽组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00和50.00mg·L~(-1)鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白水平明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性对照组和12.50及25.00mg·L~(-1)鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅲ型胶原蛋白水平明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,阳性对照组和12.50mg·L~(-1)鹿茸多肽组细胞划痕愈合率、NIH/3T3细胞中p-ERK 1/2表达水平及NIH/3T3细胞质中TGF-β1表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸多肽能促进NIH/3T3细胞增殖和胶原蛋白分泌,并提高其迁移能力,其作用机制是可能是通过激活ERK 1/2磷酸化及增加TGF-β1表达实现的。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年02期）
黎欢,成钢,李海霞,汤志宏,李淑红[6]（2019）在《东方田鼠与昆明小鼠胚胎成纤维细胞体外分离和培养比较研究》一文中研究指出为了进一步从细胞水平深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制提供试验材料,以及经济可靠地保存野生东方田鼠的生物活性细胞,试验采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法,分别取妊娠12 d的东方田鼠和昆明小鼠胚胎组织,体外分离、培养成纤维细胞,观察比较不同培养方法、胰蛋白酶浓度、消化时间、传代次数及冻存复苏等因素对分离和培养两种胚胎成纤维细胞的影响,实时观察比较两种细胞生长特性。结果表明:组织块贴壁法和胰蛋白酶消化法均能在体外条件下较好地分离、培养两种胚胎成纤维细胞;采用0.125%胰蛋白酶37℃消化组织10 min,分离的细胞普遍密度大、活力好、贴壁细胞多、速度快,是实验室分离12 d胎龄东方田鼠与小鼠胚胎组织最佳胰酶浓度;昆明小鼠胚胎成纤维细胞较东方田鼠胚胎成纤维细胞足丝长而明显,细胞核较小;两种细胞冻存后生长及活率无显着差异;在含10%血清浓度培养体系中,东方田鼠胚胎成纤维细胞生长速率慢于昆明小鼠胚胎成纤维细胞,生理代数分别为8代和7代,其中2～5代增殖旺盛。说明东方田鼠和昆明小鼠胚胎成纤维细胞在体外分离方法上差异不显着,而两者在生物学特性方面存在一定种属差异。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年05期）
王涵,邵英,朱茄慧,廖云鹏,马妍[7]（2018）在《罗格列酮与全反式维甲酸诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向骨分化研究》一文中研究指出目的探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测Runx2的转录水平以及BMP/Smad信号的激活情况。结果在C2C12、C3H10T1/2和MEFs中,PPARγ以及RAR和RXR各亚型受体均有表达。单独使用RSG或ATRA均能增加MEFs细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性,且RSG能明显增加ATRA所诱导的ALP活性。RSG或ATRA单独应用不能诱导钙盐沉积,两者合用不但增加OPN和OCN的表达,而且还诱导钙盐沉积。RSG可诱导脂滴生成,ATRA不能诱导脂滴生成,且抑制RSG促进脂滴生成的作用。RSG在MEFs中促进C/EBPα表达,但ATRA能抑制RSG的这种作用。ATRA与RSG合用可促进MEFs中Runx2的蛋白表达。同时,ATRA与RSG合用增加了MEFs中BMP/Smad的转录和Smad1/5/8的磷酸化水平,同时也增加了Smad6的mRNA表达,但对Samd7的mRNA表达有抑制作用。结论RSG与ATRA合用能诱导MEFs定向骨分化,该作用可能与ATRA抑制RSG诱导的成脂分化,并增加BMP/Smad信号转导活性有关。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2018年10期）
魏含清,裴轶劲,王丹丹,蒋杨,王春[8]（2018）在《持续低氧对小鼠胚胎成纤维细胞增殖及饲养层制备的影响》一文中研究指出背景:在传统的胚胎干细胞培养体系中,饲养层细胞制备和胚胎干细胞的培养扩增大都是在常氧条件下进行的,氧培养条件的改变有可能影响饲养层细胞,从而改变胚胎干细胞的生长特性或分化能力,但尚未见到这方面的系统研究报道。目的:观察低氧培养对饲养层细胞及小鼠胚胎干细胞干性维持的影响。方法:原代小鼠胚胎成纤维细胞分为常氧组(体积分数20%O——2)和低氧组(体积分数5%O——2)持续传代培养,绘制生长曲线,检测活性氧水平和线粒体膜电位。将小鼠胚胎干细胞分为常氧组(饲养层为常氧组小鼠胚胎成纤维细胞,体积分数20%O——2条件下培养)和低氧组(饲养层为低氧组小鼠胚胎成纤维细胞,体积分数5%O——2条件下培养),观察胚胎干细胞的生长形态,检测干细胞多能性指标Oct4、Sox2以及低氧诱导因子HIF-1αmRNA表达。结果与结论:(1)与常氧组相比,低氧组小鼠胚胎成纤维细胞增殖较快,线粒体膜电位上升,产生活性氧减少(P<0.05);(2)胚胎干细胞碱性磷酸酶染色阳性,Oct4、Sox2高表达,低氧组形成的中小集落及HIF-1αmRNA表达比常氧组显着增多(P<0.05);(3)结果表明,体积分数5%O2持续低氧培养利于维持饲养层细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)的活力和胚胎干细胞的干性维持。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年09期）
陈文操,祝嘉敏,翟玉珊,朱金玲,张玉萍[9]（2018）在《纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞的毒性》一文中研究指出目的探讨纳米钴对小鼠胚胎成纤维细胞(Balb/c3T3)的毒性作用。方法将处于对数生长期的Balb/c3T3细胞暴露于分别暴露于30、50、100 nm的0(对照)、1、5、10、50、100μg/ml纳米钴培养液培养24 h。测定细胞活性、培养液上清中LDH的活力及细胞内ROS的含量。结果与对照组比较,10~100μg/ml的30 nm纳米钴染毒组和50、100μg/ml的50、100 nm纳米钴染毒组Balb/3T3细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒Balb/3T3细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,10~100μg/ml的30、50、100 nm纳米钴染毒组Balb/3T3细胞培养液中的LDH活力及细胞内ROS的含量均较高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着纳米钴染毒浓度的升高,不同粒径纳米钴染毒Balb/3T3细胞培养液中的LDH活力及细胞内ROS的含量均呈上升趋势。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞的毒性作用与暴露剂量及颗粒直径有关,暴露剂量越大、颗粒直径越小,毒性越大。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2018年01期）
孟媛,王红雷,任晓莉,刘丽[10]（2017）在《小鼠胚胎成纤维细胞滋养层对小鼠诱导多能干细胞的作用研究》一文中研究指出目的:探讨小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)滋养层对小鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)适宜的培养条件及其作用机制。方法:取E12.5~14.5d ICR孕鼠,培养小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs),制备滋养层,收集第2~3代(P2~P3)和第6代(P6)培养2~4d MEFs滋养层细胞培养基(MEF-CM),ELISA检测P2~P3和P6 MEF-CM中Activin A、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的浓度水平。i PSCs与滋养层细胞共同培养,并进行细胞鉴定。结果:ELISA检测结果显示P2~P3 MEF-CM中Activin A、LIF的浓度显着高于P6 MEF-CM,差异有显着性意义(P<0.05)。i PSCs呈克隆状生长,细胞鉴定结果显示:拟胚体形成;碱性磷酸酶染色呈阳性;0CT4表达阳性。结论:E12.5~14.5d来源的P2~P3 MEFs滋养层能有效的抑制i PSCs的分裂,支持i PSCs的生长并维持其全能性。(本文来源于《中国美容医学》期刊2017年10期）
小鼠胚胎成纤维细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的比较不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)直接转化为诱导型神经干细胞(induced neural stem cells,i NSCs)的效率,以进一步优化诱导方法。方法构建慢病毒表达载体p Lenti6. 3-Sox2-IRES2-EGFP,分别采用单转录因子Sox2、小分子物质、转录因子Sox2联合小分子物质共同作用叁种方法将MEFs直接转化为i NSCs。q PCR检测神经干细胞的标志基因和多潜能标志基因的表达。免疫荧光检测神经干细胞的标记物nestin,计算i NSCs的转染效率。i NSCs在分化培养基中贴壁培养7～14 d,免疫荧光分别检测神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的细胞标记物MAP2、GFAP和Olig2的表达。结果诱导后4～6 d,MEFs的形态发生明显改变。免疫荧光显微镜下的结果显示诱导因子Sox2加小分子的诱导方法较单独使用Sox2和单独使用小分子物质进行诱导的效率高,差异具有统计学意义(P<0. 05)。q PCR的结果证明,3组i NSCs多种神经干细胞的标志基因(Sox2、nestin、Blbp、Pax6)的表达均较MEFs明显增高,3组间差异无统计学意义(P>0. 05);共聚焦显微镜的结果证明3种方法诱导的i NSCs具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,3组间差异无统计学意义(P>0. 05)。结论转录因子Sox2联合小分子共同作用可显着提高MEFs转化为i NSCs的效率且并不改变i NSCs的细胞功能特点。3组的i NSCs均具有神经干细胞自我增殖和多向分化的能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小鼠胚胎成纤维细胞论文参考文献
[1].黄悦,严会文,王燕燕,苏敏.不同代昆明小鼠胚胎成纤维细胞的生长特性研究[J].局解手术学杂志.2019
[2].纪琼琼,李明华,王培军.不同方法诱导小鼠胚胎成纤维细胞直接转化为神经干细胞效率的比较[J].同济大学学报(医学版).2019
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[4].令文慧.应用“间接谱系转化”技术重编程小鼠胚胎成纤维细胞成为诱导性少突胶质细胞祖细胞的研究[D].西南大学.2019
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