导读:本文包含了酵母双杂合筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,蛋白,受体,基因,乙型肝炎,诱饵,体系。
酵母双杂合筛选论文文献综述
刘换换,何国仁,向林,陈跃,孙崇波[1]（2019）在《利用酵母双杂系统筛选与春兰CgSEP1相互作用的蛋白》一文中研究指出兰花形态优雅,花香馥郁,花形奇特,具有高度特化的花器官,观赏价值较高。有关兰花花器官形成分子机理以及基因组测序正在不断研究中。为了探讨兰花基因间相互作用情况,本研究以春兰为材料进行基因克隆,获得了18个花发育相关基因的编码序列,经测序鉴定分别属于ABCDE类MADS-box家族基因。再以其中春兰AP/AGL9组的CgSEP1为诱饵蛋白,亚克隆至pGBKT7质粒,构建诱饵载体,将18个蛋白编码亚克隆至pGADT7质粒。通过酵母双杂系统筛选到了3个与其互作的蛋白:pGADT7-AG1、p GADT7-SEP2、pGADT7-AGL6-3。结果表明,C类AG-like和E类SEP-like、AGL-like家族基因参与SEP1基因春兰花发育过程,并形成多种蛋白混合物,共同调控花瓣和萼片的形成,进一步揭示了春兰的成花机理。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年02期）
陈跃,刘换换,孙崇波[2]（2016）在《利用酵母双杂系统筛选与春兰CgSEP3相互作用的蛋白》一文中研究指出春兰(Cymbidium goeringii)原产我国,古人日香祖,为中国十大名花之一,姿态秀美,是高洁典雅的象征~([1])。由于兰花具有高度进化的花器官:唇瓣和蕊柱,为研究花器官发育提供了极好的实验材料。随着对模式植物金鱼草(Antirrhinum majus)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的不断研究,1991年Coen和Meyerowitz提出植物花器官发育ABC模型,认为(本文来源于《第七届长叁角园艺论坛论文集》期刊2016-05-23）
訾亮,洪灏,翟金玲,马穗,黄惜[3]（2013）在《拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选》一文中研究指出JAZ蛋白是植物茉莉酸信号途径的重要负调控因子,JAZ与NiNJA形成蛋白复合体抑制茉莉酸下游转录因子的转录活性,NiNJA蛋白是联系JAZ蛋白与下游转录因子的重要因子。为了研究NiNJA调控的下游基因,首先构建了NiNJA基因的诱饵载体pGBKT7-NiNJA,然后转化酵母Y2HGold感受态,通过自转录激活实验,发现诱饵载体pGBKT7-NiNJA没有自转录激活活性。在此基础上,从拟南芥"Mate&PlateTM"Library进行酵母双杂筛选,获得若干个与NiNJA互作的蛋白,为下一步鉴定NiNJA的互作蛋白及茉莉酸的信号调控途径打下基础。(本文来源于《热带生物学报》期刊2013年01期）
陆孙杰[4]（2012）在《水稻OsMADS15基因功能研究及用酵母双杂筛选互作蛋白》一文中研究指出植物的生长发育和形态建成是一个极其复杂的过程,也是一系列基因在不同时间和不同空间上的顺序表达的过程。其中转录因子的表达和活性对植物调节各类基因的时空表达和植物的生长、发育具有重要的调控作用。植物MADS-box基因家族在植物的生长发育、代谢、应对生物与非生物胁迫反应等生理过程中发挥着重要的作用。水稻OsMADS15是一个AP1/SQUA亚家族的成员。本实验中,我们构建了OsMADS15过表达载体,并用农杆菌转化法得到转基因系。用半定量PCR鉴定表明,在野生型水稻中OsMADS15主要表达在节、节间、成熟叶片、内稃和外稃、浆片中,而在愈伤、根、雄蕊、心皮中表达低或没有。而在OsMADS15转基因植株中,这个基因在各个组织中均有较高的表达量。转基因水稻出现早熟现象,并且可以观察到转基因水稻的矮化。在幼苗期它的节间就已经伸长。伸长的节上长出许多不定根,用Real Time-PCR检测发现WOX11在转基因水稻中表达量提高了近10倍。在伸长的节上可以看到不定根和腋芽的生长。水稻过表达OsMADS15后分蘖推迟,并且在分蘖期时,分蘖数比野生型水稻的少。过表达OsMADS15后还使水稻长出更多伸长的节和节间。在短日照下,转基因水稻的开花期比野生型早,但是株高却普遍比野生型矮。用蛋白质双向电泳技术分析发现OsMADS15过表达植株和野生型植株的叶片和花序的蛋白表达谱有一些差异。构建了水稻全株的高质量cDNA文库。计算文库的滴度约为1.8×106cfu/ml。用PCR鉴定插入片段表明,插入片段一般都在750bp以上,空载率低,说明构建的cDNA文库质量较高。用酵母双杂交法结合构建的cDNA文库,筛选与OsMADS15有相互作用的蛋白。通过筛选得到86个阳性克隆。经测序并去除重复克隆后,共得到55个UniGene.用GO分析这些基因的功能和分类表明,在细胞成分方面,筛选到的基因主要是参与细胞、细胞的部分、大分子复合体和细胞器的组成。在分子功能方面,大部分的互作蛋白被归类到结合和催化这两种功能。在参与的生物学过程方面,大部分的蛋白在代谢过程和细胞过程中产生作用。我们也筛到了几个MADS-box基因家族的成员,如OsMADSl, OsMADS8和OsMADS14。 OsMADS1和OsMADSS是E类基因,而OsMADS14是AP1/SQUA亚家族的成员。OsMADS1是已经被证明和OsMADS15有相互作用的基因。这也证实了我们用酵母双杂交方法筛选OsMADS15相互作用蛋白的实验是成功的。在烟草细胞中用BIFC实验验证OsMADS15和候选基因OsMADS1、OsMADS14、OsMADS8之间的相互作用,结果表明在烟草细胞的核内,OsMADS15(?)(?)连的nYFP可以与OsMADS1、OsMADS14、OsMADS8相连的cYFP分别形成互补而产生荧光,证实它们之间在植物体内也具有相互作用。说明这些基因可能与OsMADS15基因的编码蛋白形成四聚体而发挥功能。这些实验为今后近一步研究OsMADS15在水稻花发育和水稻营养器官生长发育中的功能奠定了基础。(本文来源于《浙江大学》期刊2012-06-01）
季李影[5]（2012）在《应用酵母双杂系统筛选与MOG1相互作用的蛋白》一文中研究指出心脏钠通道的α亚基Nav1.5在心脏动作电位的产生和传导过程中起着重要的作用，其基因突变会导致恶性心律失常或猝死。2008年王擎研究小组通过酵母双杂交技术筛选出与Nav1.5相互作用的蛋白质MOG1，发现MOG1可以通过调节细胞膜SCN5A的表达而影响钠电流密度，揭示了MOG1对心脏钠离子通道具有重要调节作用。最近又发现MOG1基因突变可直接导致Brugada综合征。目前有关MOG1在心脏中的生理功能尚不清楚，为了探讨MOG1在心脏中的功能及其调控心脏钠通道的分子机制，本研究应用酵母双杂交系统筛选与MOG1相互作用的蛋白质，希望通过此途径找到突破点。实验首先以p3×FLAG-CMV-7.1-MOG1为模板扩增得到MOG1全长cDNA，构建诱饵载体pGBKT7-MOG1。将其转化酵母AH109细胞检测是否激活报告基因表达，再将其转化酵母Y187细胞检查其表达情况和细胞毒性作用。然后将pGBKT7-MOG1和人胎脑cDNA文库进行Yeast Mating，通过营养缺陷型培养基和α-gal分析来筛选阳性克隆。将得到的148个阳性克隆再一次进行营养筛选，经过α-gal分析、PCR分类、回复性实验排除假阳性克隆。然后将候选阳性克隆测序，并把测序结果在数据库中进行同源性比对，最终确定两种可能和MOG1相互作用的蛋白：EPB42（Erythrocyte membrane protein band4.2）、BTBD6（BTB(POZ) domain containing6）。综上所述，本实验鉴定出了两种与MOG1相互作用的蛋白，下一步拟通过Co-IP、GST Pull down以及细胞共定位进行确认。如果EPB42和BTBD6确实和MOG1存在相互作用的话，将对阐明MOG1在心脏中的生理功能以及MOG1相关心律失常疾病的发病机制提供了新的线索。(本文来源于《华中科技大学》期刊2012-01-01）
李丹,王小众,陈治新,黄月红,于皆平[6]（2004）在《酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白》一文中研究指出背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)X蛋白是一个广义反式作用因子,同原发性肝癌的发生发展密切相关,由于其功能同蛋白-蛋白间相互作用有关,故本研究利用酵母双杂合体系筛选并鉴定HBVX蛋白结合蛋白。方法:聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)法扩增HBVX基因序列,酵母双杂合体系3构建饵质粒pAS2-1-X,进行序列测定后转化入酵母菌AH109,以Westernblot法验证X-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达。pAS2-1-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养、β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落,分离实验及交合实验排除假阳性,扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定,检索其同源序列。结果:成功构建了pAS2-1-X饵质粒,Westernblot证实转化的酵母细胞能正确表达X-BD融合蛋白,pAS2-1-X及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养共长出97个菌落,β-半乳糖苷酶活性测定、分离实验及交合实验后筛选出1个阳性克隆,其cDNA插入片段与Fis基因高度同源。结论:通过酵母双杂合体系筛选出一个在酵母细胞内能与X蛋白结合的Fis蛋白。(本文来源于《癌症》期刊2004年05期）
郭大玮[7]（2004）在《自体乙酰化诱饵蛋白酵母双杂合筛选体系的建立》一文中研究指出以DNA为模板的细胞核活动如：转录、复制、重组和修复都发生于染色体中。 而染色体结构与核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4密切相关。染色体的基本单位─核小体由两个分子的H2A、H2B、H3、H4与其外围缠绕的约150bpDNA片段组成。核小体的形成还需要组蛋白－组蛋白之间，组蛋白－DNA之间的结合反应，这些反应主要发生于核心组蛋白中心结构域，即：组蛋白折迭区域。所有核心组蛋白N’末端为“活动尾”，这些“活动尾”突出于核小体之外而无固定构像。同时敲除酵母细胞组蛋白H3和H4基因或H2A和H2B基因将导致细胞死于G2/M期。许多翻译后的修饰可以发生在组蛋白尾，这些修饰包括：乙酰化、甲基化、磷酸化、泛蛋白化等。组蛋白呈高度碱性，上述修饰可改变组蛋白的荷电情况；这样会对紧凑型结构的染色体产生较大影响。通常，呈紧凑型结构的染色体不易与蛋白因子结合并阻止蛋白因子与DNA的后续反应。乙酰化后的组蛋白尾与基因组DNA反应的Km值远远高于非乙酰化组蛋白尾。亦即：乙酰化组蛋白与DNA反应减弱，从而有利于蛋白因子与DNA结合,寻找到相对应的DNA元件。通常，高水平乙酰化组蛋白有利于转录激活，低水平乙酰化组蛋白导致转录抑制／沉默。已知乙酰化组蛋白可以结合蛋白中高度保守序列─bromodomain,含bromodomain的蛋白大都为转录激活蛋白因子。甲基化组蛋白可以结合chromodomain,这一结构域常见于转录抑制蛋白因子中。除乙酰化外，其它组蛋白修饰如：磷酸化、甲基化和泛酸化也与特异性基因转录调节有关。此外，不同的组蛋白修饰之间相互作用,如:组蛋白H3S10磷酸化可以促进H4K14的乙酰化,H4R3甲基化可增强H4K8乙酰化等。上述证据倾向于支持这种观点：每种组蛋白修饰可以被其它蛋白或蛋白结构域所解读，从而引发不同的生物学过程。2000年, David Allis 首次提出了”组蛋白密码”假说，该假说认为不同形式修饰的组蛋白可以作为特定的信号被蛋白因子识别，这些蛋白因子在包含相应组蛋白修饰的基因组区域实施其功能。到目前为止，所有与修饰后组蛋白结合的蛋白鉴定仅限于生物化学方<WP=8>法，而在基因组范围内的筛选工作还很少，有报道在细胞内表达异源性的蛋白激酶，用双杂合试验进行翻译后修饰特异性结合蛋白的筛选。如：在酵母中表达酪氨酸激酶或在大肠杆菌中表达哺乳动物丝氨酸／苏氨酸激酶，以使底物磷酸化后再用双杂合试验来进行筛选。由于磷酸化过程依赖于传统的酶－底物反应（反式作用），如果外源性的酶难以从宿主细胞中众多的蛋白中识别特异蛋白底物则接下来的筛选可能失败。因此，为提高底物磷酸化的效率，增加“诱饵”蛋白的特异性就必须过量表达激酶，而这样可使宿主细胞中蛋白被不当修饰导致细胞生长停滞。为使细胞内酵母双杂合试验“诱饵”蛋白能特异地、持续修饰，我们将Gcn5 HAT结构域和组蛋白H3尾相连，这样酶与底物的物理性连接可能使“自体催化”现象发生在一个蛋白分子内而产生高效率的乙酰化修饰。我们将组蛋白H3尾（1-59位氨基酸）与Gcn5(18-252位氨基酸)野生型相连,再连接Gal4DNA结合结构域和HA；用无HAT 活性的Gcn5 变异体作为对照。将含有上述融合蛋白ORF的质粒和载体对照分别转入酵母细胞中(PJ69-4α)，用抗HA和抗组蛋白H3K9/K14乙酰化抗体检测酵母全细胞提取液中人工融合蛋白的工作情况。结果显示与Gcn5 野生型相连的组蛋白H3/H4被乙酰化,而与变异体Gcn5 F221A连接的组蛋白H3却无乙酰化。这个现象在其它嵌合蛋白中也得到了印证，如将GST 取代HA,质粒在大肠杆菌中表达，也得到同样结果。重要的是，用抗非乙酰化H3抗体检测在酵母细胞中表达的融合蛋白，与Gcn5野生型相连接的组蛋白H3的信号很弱,表明Gcn5野生型自体催化效率很高。这些结果说明以下问题：1、Gcn5在融合蛋白中,尽管有Gal4 DBD和HA的存在,仍然能够催化其连接的底物。如此，其它HAT也有可能在类似的融合蛋白中起作用。2、Gcn5在融合蛋白中仍具有底物特异性。3、对于Gcn5 HAT催化活性丧失的变异型(F221A)，尽管连接了底物，但仍然不能行使转乙酰基的功能；因此，这一重组体可以用来作为阴性对照以排除与组蛋白乙酰化无关的反应。4、尽管在酵母细胞内有多种HAT,其中至少两种HAT可以乙酰化组蛋白H3；但没有一种HAT可以催化融合蛋白内的组蛋白H3。其中的原因可能是正常情况下细胞内的HAT被转录因子结合到特异的DNA位置，因此内源性<WP=9>的HAT催化融合蛋白中组蛋白H3乙酰化的可能性甚小。5、酵母细胞内至少有5种确定的组蛋白脱乙酰化酶(HDACs)以及数种HDAC同源酶,而本试验的结果表明在上述酶同时存在的情况下,融合蛋白的乙酰化作用占主导地位。总之，对于酵母细胞双杂合筛选试验，融合蛋白GAL4DBD-H3-Gcn5 wt-HA可以作为高特异性、高催化效率的自体催化“诱饵”蛋白；含有Gcn5 野生型的融合蛋白可以用来检测乙酰化结合蛋白，而含有Gcn5F221A的融合蛋白可以筛除与组蛋白乙酰化无关的反应。我们还构建了GAL4DBD-H4-Gcn5 wt-HA和GAL4DBD-H4-Gcn5 F221A-HA重组体,试验表明: GAL4DBD-H4-Gcn5 wt-HA 融合蛋白有自体乙酰化现象(H4K8)而 GAL4DBD-H4-Gcn5F221A-HA则无。为检测融合蛋白能否用于酵母双杂合?(本文来源于《山西医科大学》期刊2004-05-01）
李渝萍,陈敏,陈彬,陈健,李强[8]（2003）在《利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质》一文中研究指出目的 利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Humanestrogenreceptorrelated receptorα1,hERRα1)相互作用的蛋白质 ,特别是新的核受体辅助活化因子 ,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参与ERR1调控基因的表达。方法 以质粒pGBT9 hERRα1 LBD为“诱饵” ,筛选人乳腺组织cDNA文库。结果 筛得有阳性相互作用的克隆共 17个。除 3种为已知核受体辅助调节因子外 ,其他为功能已经明确的蛋白 ,其中有3种与hERRα1有明显相互作用。结论 核受体辅助活化因子SRC 1,RIP14 0 ,TRIP及数种已知蛋白能与孤儿核受体hERRα1在乳腺组织中相互作用(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2003年15期）
李丹[9]（2002）在《酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S_1相关蛋白的研究》一文中研究指出目的 利用酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前 S1 (pre S1 )蛋白相关蛋白 ,以利于探讨前 S1 蛋白在乙型肝炎病毒的入胞机制。 方法 以 HBV DNA阳性血清为模板通过PCR法扩增含 Eco R 与 Pst 酶切位点的 pre S1 基因序列 ,p AS2 - 1载体及 pre S1 基因 PCR产物经双酶切并连接 ,转化到大肠杆菌 JM10 5 ,对重组质粒 p AS2 - 1- pre S1 进行序列测定。乙酸锂转化法将重组质粒转化入酵母菌 AH 10 9,以Western Blot法证实重组质粒在酵母细胞中的表达。将p AS2 - 1- pre S1 及正常成人肝细胞 c DNA文库共转化酵母细胞 ,通过选择性培养、L ac Z活性测定筛选阳性菌落 ,分离实验及交合实验排除假阳性 ,PCR扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定 ,结果提交 NCBI的 BL AST应用程序 ,在Gene Bank 数据库查询其同源序列。 结果 重组质粒p AS2 - 1- pre S1 经序列测定含有完整的 pre S1 基因片段 ,Western Blot证实转化的酵母细胞能正确表达完整的pre S1 - BD蛋白 ,p AS2 - 1- pre S1 及正常成人肝细胞 c DNA文库共转化酵母细胞后 ,在 5× 10 6 转化子中 ,经选择性培养共长出 97个菌落 ,17个为 L ac Z阳性菌落 ,分离实验及交合试验筛选出 1个阳性菌落 ,PCR扩增产物经 Gen Bank数据库查询与人类初期多肽相关复合体 α(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2002年03期）
李丹[10]（2002）在《酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1相关蛋白的研究》一文中研究指出目的：利用酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1(preS1)蛋白相关蛋白，以利于探讨前S1蛋白在乙型肝炎病毒的入胞机制。 方法：以HBVDNA阳性血清为模板通过PCR法扩增含EcoRI与PstI酶切位点的pres1基因序列，pAS2-1载体及pres1基因PCR产物经双酶切并连接，转化到大肠杆菌JM105，对重组质粒pAS2-1-pres1进行序列测定。乙酸锂转化法将重组质粒转化入酵母菌AH109，以Western Blot法证实重组质粒在酵母细胞中的表达。将pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞，通过选择性培养、LacZ活性测定筛选阳性菌落，分离实验及交合实验排除假阳性，PCR扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定，结果提交NCBI的BLAST应用程序，在GeneBank数据库查询其同源序列。 结果：重组质粒pAS2-1-pres1经序列测定含有完整的pres1基因片段，Western Blot证实转化的酵母细胞能正确表达完整的pres1-BD融合蛋白，pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后，在5×10~6转化子中，经选择性培养共长出97个菌落，17个为LacZ阳性菌落，分离实验及交合试验筛选出1个阳性菌落，PCR扩增产物经GenBank数据库查询与人类初期多肽相关复合体a亚单位(Homo sapiensnascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide NACA)同源。 结论：成功构建了 pASZ刁个 真核表达载体，并通过酵母双杂合体系筛选体内与 presl相互作用的蛋白 NACA。(本文来源于《福建医科大学》期刊2002-04-01）
酵母双杂合筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
春兰(Cymbidium goeringii)原产我国,古人日香祖,为中国十大名花之一,姿态秀美,是高洁典雅的象征~([1])。由于兰花具有高度进化的花器官:唇瓣和蕊柱,为研究花器官发育提供了极好的实验材料。随着对模式植物金鱼草(Antirrhinum majus)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的不断研究,1991年Coen和Meyerowitz提出植物花器官发育ABC模型,认为
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母双杂合筛选论文参考文献
[1].刘换换,何国仁,向林,陈跃,孙崇波.利用酵母双杂系统筛选与春兰CgSEP1相互作用的蛋白[J].基因组学与应用生物学.2019
[2].陈跃,刘换换,孙崇波.利用酵母双杂系统筛选与春兰CgSEP3相互作用的蛋白[C].第七届长叁角园艺论坛论文集.2016
[3].訾亮,洪灏,翟金玲,马穗,黄惜.拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选[J].热带生物学报.2013
[4].陆孙杰.水稻OsMADS15基因功能研究及用酵母双杂筛选互作蛋白[D].浙江大学.2012
[5].季李影.应用酵母双杂系统筛选与MOG1相互作用的蛋白[D].华中科技大学.2012
[6].李丹,王小众,陈治新,黄月红,于皆平.酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白[J].癌症.2004
[7].郭大玮.自体乙酰化诱饵蛋白酵母双杂合筛选体系的建立[D].山西医科大学.2004
[8].李渝萍,陈敏,陈彬,陈健,李强.利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质[J].第叁军医大学学报.2003
[9].李丹.酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S_1相关蛋白的研究[J].福建医科大学学报.2002
[10].李丹.酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1相关蛋白的研究[D].福建医科大学.2002
论文知识图
