副干酪乳杆菌β-葡糖苷酶的表达、纯化及酶学性质研究

论文摘要

为了实现糖苷类物质的高效转化,将来源于副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei） TK1501β-葡糖苷酶基因连接于表达载体pET28a（+）上,在E. coli BL21中表达,重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶,其分子质量和比酶活分别为86. 63kDa和675. 56U/mg。最适作用温度和pH分别为30℃和6. 5。Mg2+和Ca2+对β-葡糖苷酶酶活抑制作用最小,Cu2+几乎使其丧失催化活性。其底物特异性较宽泛,对大豆异黄酮、栀子苷、水杨苷、七叶苷、虎杖苷、熊果苷均有降解作用。以β-pNPG为底物时,该酶的Km和Vmax分别为1. 44mmol/L和58. 32mmol/（L·s）,催化系数kcat为3 982/s。结果与分析表明,来源于副干酪乳杆菌TK1501β-葡糖苷酶对水解大豆异黄酮和合成糖苷将会发挥重要作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 产β-葡糖苷酶工程菌的构建
•     1.2.2 β-葡糖苷酶的表达及纯化
•   1.3 β-葡糖苷酶酶学性质
•     1.3.1 β-葡糖苷酶活力测定
•     1.3.2 酶最适反应温度和热稳定性的测定
•     1.3.3 酶最适反应pH和pH稳定性的测定
•     1.3.4 金属离子对酶活力的影响
•     1.3.5 酶动力学研究
•     1.3.6 酶底物选择性研究
•   1.4 β-葡糖苷酶降解和合成反应
•     1.4.1 β-葡糖苷酶降解反应
•     1.4.2 β-葡糖苷酶合成反应
• 2 结果与讨论
•   2.1 产β-葡糖苷酶工程菌的构建
•   2.2 β-葡糖苷酶GLU-1的诱导表达及纯化
•   2.3 β-葡糖苷酶酶学性质研究
•     2.3.1 温度对β-葡糖苷酶催化活性和稳定性的影响
•     2.3.2 pH对β-葡糖苷酶催化活性和稳定性的影响
•     2.3.3 金属离子对β-葡糖苷酶酶活的影响
•     2.3.4 β-葡糖苷酶动力学研究
•     2.3.5 酶的底物选择性研究
•   2.4 β-葡糖苷酶降解和合成反应
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢玉锋,韩雪梅,路福平

关键词: 副干酪乳杆菌,葡糖苷酶,纯化,酶学性质

来源: 中国生物工程杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学生物工程学院,哈尔滨学院食品工程学院

基金: 宁夏回族自治区重点研发计划(2018BBF02008),国家级大学生创新创业训练计划(201810234004)资助项目

分类号: TS201.3

DOI: 10.13523/j.cb.20190508

页码: 72-79

总页数: 8

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